La Galleria dell'Accademia fu fondata nel 1784 dal Granduca Pietro Leopoldo I che costituì il nucleo principale della collezione apportando dipinti antichi affinché gli allievi dell'Accademia di Belle Arti potessero utilizzarli come modelli per le esercitazioni.

A questo nucleo principale di dipinti si sono aggiunti con il tempo dipinti che provenivano da chiese e conventi fiorentini, ma la popolarità della Galleria dell'Accademia è dovuta alla presenza di alcune sculture di Michelangelo:  i Prigioni, il San Matteo e in particolare il celebre David, qui trasportato nel 1873, per il quale venne realizzata la scenografica galleria.

Nell’edificio è ospitato il Museo degli Strumenti Musicali, con circa cinquanta strumenti musicali  provenienti dalle collezioni private dei granduchi di Toscana, Medici e Lorena, raccolti tra la seconda metà del secolo XVII e la prima metà del XIX; tra questi una viola tenore e  un violino di Stradivari del 1716 e un violoncello di Niccolò Amati del 1650. Nel museo è inoltre esposto il più antico pianoforte verticale oggi conservato.

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